实验失败时,最害怕的是什么?

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我们都知道,WB、IHC、ELISA
等常规实验技术都不离开抗体,抗体的质量优劣关乎实验的成败,一旦抗体造假,不仅浪费了科研者的宝贵时间、金钱及实验材料,甚至有可能让研究者误入歧途(得出一系列错误的实验结果或重复性差),而这无形中会损害他们所作出的努力以及学术声誉。

我们会怀疑仪器试剂、怀疑实验方法、

抗体造假手段可谓是五花八门,比如:直接造假(根本不知道瓶子里装的是什么)、用分子量接近的廉价抗体冒充昂贵的稀有抗体等,最常见的就是稀释抗体,把一份试剂稀释成
5 份,导致效价下降,有时有用,有时没用。

常见的国产品牌也有很多,如国产索莱宝品牌这几年犹如异军突起,近年来也被国内外学术界认可,其中包括价格、质量、包装、到货速度
、售前咨询、售后支持等多方面,以及目前暂时还未出现假货,唯一不足之处:非常用产品在文献支持方面有些不足。

抗体造假,是整个试剂行业最严重的现象。据权威机构显示,在上千份抗体产品质量投诉中,假货问题占了
43%;在 500 份问卷调查中,有 43% 的人曾使用假冒伪劣试剂耗材;703
位生物学家,50% 无法重复自己的实验结果。

一、抗体最基本的信息

而抗体之所以这么不稳定并难以产生有效性,究其原因,一方面是因为抗体市场庞杂带来了抗体质量的残次不齐,另一方面则是因为抗体本身就具有抗原交叉反应性、多样性和实验差异性,进而也会影响抗体的特异性和亲和性。

常见的进口品牌 Abcam,CST
等不用说,大家都知道相对其他进口品牌来说,货期快,很多都国内有现货,又是知名品牌,很多文献有提及,另外身边人用的也多,所以购买者居多。

三、抗体选择的「潜」规则

4.
抗体的运用可以多种实验,反应物种可以多样(实验必须是同一类实验,别人做
IHC 的抗体用做 WB 可能是没有结果的);

5.
厂家官网发布出的实验效果图(完善的验证数据及详细的信息标准是优质抗体选择的必要条件),比如是否明确标注其可以用于
WB、IHC
等实验、是否有足够的数据支持证明该抗体适用于某一组织或者样本(样本的处理过程和要求)、是否有明确的抗体建议稀释浓度、该抗体的识别位点是连续的氨基酸序列的一级结构还是非连续性氨基酸的三维结构位点,天然的还是变性的……这些信息和数据的真实性及完整性是保证
WB、IHC 等实验顺利进行的关键;

二、单克隆和多克隆的选择

即使是未经污染的抗体有时也会给实验带来困难,不同批次的抗体可能存在自然差异,它们可能靶向研究者预期之外的蛋白质。所以阴性结果可能是多种原因导致的,这种不确定性使得假冒试剂很难被发现。

现阶段我们身处于抗体乱象泥潭之中,如何获得一支真正有效的优质抗体?如何选择和购买抗体是关键,想要买到性价比高的抗体,有没有「潜」规则,如何炼就自己的火眼金睛?请继续往下看。

4.
如果是磷酸化抗体的:对磷酸化位点是否有要求,最好提供要检测的磷酸化位点,如果使用者对磷酸化位点没有要求的,就由查到的品牌厂家来推荐,厂家会推荐他们卖得比较多而且效果比较好的磷酸化抗体。

对,就是对失败的原因一无所知。

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  1. 质量好,价格便宜(性价比高,索莱宝产品价格是国外的 1/3
    左右,而且有小包装规格);

  2. 到货速度快(国外公司一般3~4周,索莱宝公司大多有现货,最多 1 周);

  3. 售前售后有保障(国外抗体咨询投诉周期一般都非常长,索莱宝公司一般 1
    周就可以解决,还可以免费索取一些抗体小样,抗体免费试用活动正在火热进行);

  1. 要购买的抗体名称(基因名,蛋白名都可以,比如 AKT)

  2. 要用于什么实验(可用于多种实验,比如 WB / IHC / FCM / IF)

  3. 样本是什么种属(可用于多种种属,比如 human / mouse / rat / rabbit)

四、进口还是国产品牌的选择

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有人认为单抗比多抗好,其实这并不是一个严谨的观点,只能说在可能性上单抗的特异性更好一些,而多抗的亲和力会优于单抗,并且特异性并不一定就逊于单抗,主要看抗原的设计水平。

9.
常言道,实践是检验真理的唯一标准,对于文献或官网中现成的已经验证过的亲和力高、特异性强的抗体,我们只需将拿来主义进行到底即可。此时仍需要特别注意的是文章的可靠性;即便如此,在相应抗体购买回来后,建议做些简单预实验来保证抗体的特异性。如果只有阳性有条带,阴性没有条带,恭喜你,你确实买到了一支靠谱的好抗体,可以放心大胆的开始正式实验了。

怀疑操作流程,甚至怀疑人生。

6.
别找纯代工的品牌多花冤枉钱,制造和生产型的供应商对自己产品更加了解,出现问题容易找到原因;

常常有实验员哭诉,为什么免疫学实验

不建议纠结于单抗好还是多抗好。在选择上一般建议实验种属和抗体种属亲缘性越远越好,不宜同源。

  1. 一定要从正规渠道购买(生产商和制造商或正规的授权经销商);

  2. 有效的内参抗体是实验结果真实可靠的重要凭证,尤其在 WB
    实验中,常会借助内参来校正蛋白定量、上样过程中存在的实验误差。值得注意的是,不同的内参抗体只适用于一定范围的样本和组织,我们需要查阅参考文献,并根据样本和组织的差别选择合适的内参抗体,以确保实验的准确性,索莱宝拥有完备的标签内参抗体库;

又双叒叕失败了?

其结果竟令人大跌眼镜:49% 的抗体完全无效,且仅有 7%
的抗体被认为是完全有效且拥有前后实验一致性。据估计,每年因购买质量差的抗体导致的损失达到
8 亿美金。

图片来源:站酷海洛

殊不知,问题很有可能出现在选抗体上。

关于抗体质量稳定性和可靠性问题,早在 08 年,瑞士科研项目 HPA 就曾对 29
家供应商的 9,000 多种抗体进行 WB 和 IHC 验证,来检测这些抗体是否有效。

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